做定量PCR之前需不需要检测RNA的完整性的简介

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话题：做定量PCR之前需不需要检测RNA的完整性回答：不需要，如果是做cDNA文库就要检测RNA的完整性。PCR只是扩增一个片段。话题：如何检测RNA提取成功或如何检测RNA的完整性？回答：跟琼指糖凝胶电泳，有2S和1S的带，就说明提取成功，如果2S和带比1S的带亮2倍，并且后面。

小知识：做定量PCR之前需不需要检测RNA的完整性

做定量PCR之前需不需要检测RNA的完整性

时间:2016-03-19 03:18 来源: 我爱IT技术网编辑:佚名

话题：做定量PCR之前需不需要检测 RNA的完整性

回答：不需要，如果是做cDNA文库就要检测 RNA的完整性。PCR只是扩增一个片段。

话题：如何检测 RNA提取成功或如何检测 RNA的完整性？

回答：跟琼指糖凝胶电泳，有2S和1S的带，就说明提取成功，如果2S和带比1S的带亮2倍，并且后面没有拖带，说明没被降解，完整性好

话题：我用CTAB法提的叶片RNA,测定的纯度都在1.

问题详情：是DNA没去干净还是RNA已经降解了呢？谢谢

回答：260/20这个数值比较理想。可能是RNA降解了。 DNA没去除干净，那就用DNA酶消化时间长一点，DNA酶量大一点。 RNA降解注意保存条件，可以先将其反转录CDNA后在保存。这个数值，理论上说明RNA纯度是比较好的

话题：rna干扰小鼠体内实验时,怎样用流式细胞仪检测荧光标记的

问题详情：怎样用流式细胞仪检测荧光标记的siRNA被肝脾细胞摄取的情况？

回答：准备单细胞悬液，不同的所用的酶是不同的。肝脏和脾脏肯定不一样。你最好查一下文献。如果没有现成的文献，建议多用几种不同的消化液多试几次。或者直接用机械分离然后过滤也可以。不需要抗体。你又不看抗原

话题：RNA的提取和反转录的实验步骤？

回答：小麦总RNA的提取实验目的从化小麦苗中提取总RNA，可以为cDNA文库的构建做好准备。我们重点是要保证RNA的完整性、产率、防止修饰和纯度，尤其是完整性、防止修饰和纯度。RNA是单链，2'OH是它的化学性质远比DNA活泼。所以，提取RNA颇为不易。加之RNA的不均一性，要将所有的RNA(rRNA、tRNA、mRNA)完全提出，更加有挑战性。而Rnase是无处不在的（这种酶遇高后也不会丧失活性，复性容易，在胞内外都有分布，不需激活，不需要二价金属离子的配合）； RNA还最怕DNA ，因为若做RT-PCR,DNA的存在会降低产物的纯度和效率所有以上的因素都构成了我们成功提取RNA的障碍。但是我们可以不用考虑

话题：热酚法抽提酵母RNA的实验目的,实验原理,实验步骤,哪

问题详情：热酚法抽提酵母RNA的实验目的，实验原理，实验步骤，哪位大神

回答：目的：学并掌握用热酚法抽提酵母RNA原理：从细胞或中提取总RNA的试剂它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，裂解细胞并释放出RNA，酸性条件使RNA与DNA分离，加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白步骤：步骤：1. 将酵母细胞培养在3ml选择性培养基中，30℃过夜旋转培养。2. 稀释过夜培养的菌液，重新在10ml培养基中培养细胞。3. OD600达到1.0时，收菌，4000rpm/min离心5min，弃培养基

话题：我做的实验是提取总的RNA,然后反转录,再PCR,最后出来

问题详情：我的条带为一片，没有特意性的

回答：这就是特异性不好，建议做如下改进：1，控制好RNA提取过程，尽量减少RNA降解和基因组DNA的混入；2，严重怀疑你的模板量过高，把模板稀释10-1000倍的梯度试试；3，做二阶段度pcr，先用稍高退火度p上5循环，剩余的再用你现在的度，或者有梯度pcr仪的话，做梯度pcr;4，如果镁离子浓度较高，可稍降镁离子浓度。若有疑问，继续讨论，纯属手打，采纳，祝实验顺利！

参考回答：1.cDNA产量的很低A: RNA模板质量低B：对mRNA浓度估计过高C：反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足D：反应体积

话题：如何评价总RNA或mRNA的质量

回答：A230;A20的比值是一种RNA纯度检测方法，用于评估有机溶剂残留； 1。纯RNA的OD260/.0、RT-PCR，可以鉴别出溶液纯度及浓度，10为RNA完整性最好：微量分光光度计测260nm吸收值计算：微量分光光度计测260nm/,R 值可能会大于 2（一般应该是OD20。一般的，DNA.时。光谱分析（NANODROP）利用物质对不同波长光的吸收度的不同：蛋白质的吸收峰，并以软件的RIN(RNA Integrity Number)分数评估；2. 相关概念 RNA质检参数OD260/，可以根据自己的需要决定这份RNA 的命运，即使比值超出这个范围、蛋白质及有机溶剂的影响，说明RNA已经水解成单核酸了。当R lt：核酸的吸收峰测。 l RNA纯度 RNA在纯化过

话题：生物所有有关物质鉴定实验所用的试剂、结果（最好说出

问题详情：生物所有有关物质鉴定实验所用的试剂、结果（最好说出显什

回答：1 斐林试剂检测可溶性还原糖原理：还原糖+斐林试剂砖红色沉淀注意：斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用，而且是现用现配，条件需要水浴加热。应用：检验和检测某糖是否为还原糖；不同生物中含糖量高低的测定；在医学上进行疾病的诊断，如糖尿病、肾炎。2 苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ检测脂肪原理：苏丹Ⅲ+脂肪橘；苏丹Ⅳ+脂肪红色注意：脂肪的鉴定需要用显微镜观察。应用：检测食品中营养成分是否含有脂肪。3 双缩脲试剂检测蛋白质原理：蛋白质+双缩脲试剂紫色注意：双缩脲试剂在使用时，先加A液再加B液，反应条件为常（不需要加热）。应用：鉴定某些消化液中含有蛋白质；用于劣质奶粉的鉴定。

参考回答：1 斐林试剂检测可溶性还原糖生成砖红色沉淀注意：斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用，而且是现用现配，条件需要水