根据DNAmarker在凝胶电泳中条带亮度-小知识

话题：根据DNA marker 在凝胶电泳中条带亮度,测定目的质粒的

回答：在同一块胶中,同样的反应体系(模板浓度,dNTP浓度,PCR反应程序等等)的不同样本,如果胶带亮度不一致可以认为二者浓度有差异。这就是半定量PCR。 精确定量需要用到realtime

话题：模板的浓度对PCR有什么影响,一般要多大浓度?

回答：那要看你用的是什么模板了。pcr的灵敏度很高,几pg的DNA就能检测出来了。一般用pcr产物或者质粒做模板,只需要1ng左右就可以了,如果是基因组或者cDNA做模板,模板量可适当增加。

参考回答：对普通PCR里说,一般初始模板 数目在1万到100万之间为宜,扩增25个循环左右会得到理想扩增结果。模板太少有时无法扩出目

话题：什么是基因拷贝数

问题详情：希望详细明白的说明基因拷贝数的定义。最好是专业人士来回答。

回答：实时荧光定量 PCR技术用于检测 入的外源基因拷贝数 自 14 年,第一例转基因植物 Flr Sr TM 西红柿在美国上 ,到 2003 年底,世界范围内转基因作物已遍布 1 个 和地 ,种植面积达 16.2 万英亩 (60 万公顷 )( Ewen SWB,1; 北国网 ) 。大量实践使得植物转基因技术已有了比较经典和成熟的技术路线。除了在商业领域内 抗性植株外,植物转基因技术还延伸到植物生理学 (生化反应途径、植物抗病、抗逆性)以及生物反应器 ( 物、疫苗等)中( Khachatourians 2002 )。 一般经过上游表达载体的设计构建以及下游转化体系的建立、转化品系的筛选鉴定等一系列步骤后,即 T 0 转基因植

参考回答：用我自己理解的话来说 就是一段基因在基因组中出现的次数 如果基因组中这段基因只出现一次就是单拷贝 出现两次及以上就是多拷贝了

话题：请问有设么关于质粒构建、引物设计的文献可以看吗

回答： 文库搜索质粒构建和引物设计即可,很详细。引物设计的原则 引物设计有3 条基本原则:首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物与引物之间避 免形成稳定的二聚体或发夹结构,再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即 错配)。 具体实现这3 条基本原则需要考虑到诸多因素,如引物长度(primer length),产物长度 (product length),序列Tm 值(melting temperature),引物与模板形成双链的内部稳定性 (internal stability, 用?G 值反映),形成引物二聚体(primer dimer)及发夹结构(duplex formation and hairpin)的能值,在错配位点(false priming site)的引发效率,引物及产物的 GC 含量(position

参考回答：质粒构建看 克隆、 生物学即,知道什么是质粒载体就该会的。引物设计看一本PCR方面的专著即可。

话题：以质粒作为模板,pcr出现拖尾现象,为什么?

回答：没有具体描述,只能给出几个猜测。你先看看marker跑得好不好。marker也不好的话:1.跑胶时电压太高2.染料问题3.胶没做好如果marker没有问题的话:1.loading buffer 可能有细菌 2.pcr问题

参考回答：我觉得原因是:你用的质粒 浓度太高了。你要是按照普通基因组DNA PCR的浓度来做质粒PCR,或者稀释了质粒DNA但不够倍数,那

话题：从DMT菌种提取质粒能再次用做点突变的模板吗

问题详情：从DMT菌种提取质粒能再次用做点突变的模板吗?还是需要转化到

回答：没必要吧,DMT本身就是工程菌了。你做点突变,也就是以他为模板,量需要的很少的。即使是低拷贝质粒,经过质粒提取,这浓度是足够做pcr模板了,建议你把质粒再稀释100-1000倍做模板,否则浓度太高,影响pcr效率和点突变特异性。个人见解,仅供参考,祝愉快!

话题：PCR问题?

问题详情：PCR扩增中都可能遇到哪些问题详情题,请举例说明,并介绍解决方法,

回答：PCR产物的电泳检测时间 一般为4h以内,有些最好于当日电泳检测,大于4h后带型不 则甚致消失。 假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及,④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析 。 模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚。⑤模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时,不出现扩增带,极有可能是标本的消化处理,模板核酸提取过程出了 病,因而要配制有效而稳定的消化处理液,其程序亦应固定不宜随意更改。 酶失活:需

话题：2011 生物

回答：2011年 生物试卷 一、单项选择题:本部分包括20题,每题2分, 40分。每题只有一个选项最符合题意。 1.下列物质合成时,需要模板的是 A.磷脂和蛋白质B.DNA和酶C.性激素和胰岛素D.神经递质和受体 2.关于 细胞结构和功能的叙述,正确的是 A.在细胞核内RNA能够传递和表达遗传 B.核糖体是蛋白质合成和加工的主要场所C.线粒体内膜蛋白质和脂质的比值大于外膜D.高尔基体与有丝 过程中纺锤体形成有关 3.下列与果酒、果醋和腐乳 相关的叙述,正确的是 A.腐乳 所需要的适宜 度最高B.果醋发酵包括无氧发酵和有氧发酵C.使用的菌种分别是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌D.使用的菌种都具有细胞壁、核糖体、

话题：DNA测序仪

问题详情：谁知道dna测序仪的使用方法? 强调:是测序仪 (不是过去那些过

回答：这是我在网上找来的,自己感觉说的挺全的,你看看。 不过我要说一句,目前DNA测序所依靠的还是Sanger的原理,只是结合了荧光染料,提高了灵敏度。 DNA测序原理和方法 DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PEABI 已生产出33型、3型、310型、300和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种型号。本实验介绍的是ABIPRI 310型DNA测序仪的测序原理和 作 程。 原理 ABIPRI 310型基因分析仪(即DNA测序仪),采用 细管电泳技术取 传统的聚丙烯酰胺平

话题：做荧光PCR的标曲为什么要用质粒做的标准品呢?用梯度稀释

问题详情：做荧光PCR的标曲为什么要用质粒做的标准品呢?用梯度稀释的菌

回答：用梯度稀释的菌悬浮液也可以,前提是你在菌悬浮液梯度稀释效果很好。但是由于菌是悬浮在溶液中的,由趣撺拜雇之概瓣谁抱京于重力的作用会造成细菌的不均匀分布,或者多个菌结成团。而质粒可以很轻松的达到理想的梯度稀释,所以在做PCR的过程中,标准曲线的线性梯度曲线会很漂亮。

参考回答：因为细菌DNA比质粒要大,而且提取过程中容易产生片段,这样的DNA远没有提纯过的质粒好,拿这样的DNA去做标准曲线的话,扩增出来的产滋皇枯绞瀹悸筷溪困娄物不一定唯一,而且扩增片段浓度也不一定是和模板浓度成线 ,这样的标准曲线是不能用的。