我PCR产物大小141bp-小知识

话题：我PCR产物大小141bp,纯化后,连接到pGEM

问题详情：我想知道假如用pGEM-T通用引物M13F 5'

回答：这个问题是这个样子的:首先你要有pGEM-T载体跟你片段的序列,把他们粘贴 到word文档里。其次,在文档里把你的片段序列 到载体序列中,位置要跟片段实际在质粒中 入的位置相同。然后在构建好的理论序列上查找到5‘引物的位置,标出颜色,再找到3’引物的位置,同样颜色标出。最后将5‘和3’之间的序列选中字数统计就行了。 也可以用DNAman之类的,但没这个方便。

话题：PCR产物TA克隆,PGEM

问题详情：PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体的序列是大约3000bp,PCR产物的

回答：那得看你用多少浓度的胶跑,如果用1%的琼脂糖电泳30min,你的主带(超螺旋的闭环质粒DNA)会在3Kb-2Kbmarker之间,如果是单酶切产物,则应该在3.5kb的marker附近。

话题：pGEM

回答：不知道你的这个问题,以我的经验回答下吧。我的是PCR产物胶回收后连接的T easy载体,转化克隆,送去测序。因为pcr两头保真性低所以连T载体克隆,有的T载体是带有多克隆位点 的,而T easy载体没有,为了不妨碍自己的后续酶切选了T easy载体。 不知道能帮到你吗?

话题：连接反应中如何调整载体与片段的比例

问题详情：我用的是promega的PGEM-T载体 感受态用TIANGEN TOP10 以载

回答：T载体应该很容易连接啊。连接体系要小,一般10ul足够了,再说你还是用的商业感受态。 还有你PCR产物是否检测过,用的是什么聚合酶,有的高保真聚合酶没有加A特性的。 PCR回收的产物浓度如何?跑出带太淡了,或者产物太大也会连不上。 最好告诉我你连的大小到底多少bp。 连接时间是否过短呢,回收的PCR产物是否质量过低。这些你都应该考虑。

话题：pGEM

问题详情：使用pGEM-T载体克隆了一段500bp的片段,想通过pcr后再酶切分

回答：S5un2和S3un2扩增出大约1.2kb的产物,用HincⅡ和MspⅠ进行双酶切;S5un3和S3un3扩增出大约1.4kb的产物,用BglⅡ和PstⅠ进行双酶切;S5un4和S3un4扩增出大约1.5kb的产物,用BstEⅡ和DraI进行双酶切。

参考回答： ,你下次能不能换个简单点的话题,偶看不懂

话题：PCR产物TA克隆,PGEM

问题详情：PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体的序列是大约3000bp,PCR产物的

回答：那得看你用多少浓度的胶跑,如果用1%的琼脂糖电泳30min,你的主带(超螺旋的闭环质粒DNA)会在3Kb-2Kbmarker之间,如果是单酶切产物,则应该在3.5kb的marker附近。

话题：就可与pGEM

回答：那要看你做什么用,如果下一步你要构建载体的话,就需要相应的酶切位点,以便下一步 作。如果不做就没必要了。

参考回答：不用的,因为你PCR的时候加的 Tag酶,在扩增过程中它会在末端加上AT vector就会与A结合了你可以在下一步步骤中,选择酶切位

话题： pET,pT

回答：VP3是一种能特异性诱导 性肿瘤细胞凋亡的病 蛋白。由于它是一种不能透过细胞膜的大 蛋白,目前主要通过真核表达载体将其基因导入肿瘤细胞内表达而发挥作用。因转基因 作困难、真核表达效率较低且其临床应用的 性近年来受到了质疑,因此如能在体外制备出VP3蛋白并通过有效的方法将其导入肿瘤细胞内发挥作用,则能有效解决上述问题。TAT-PTD是一种能快速高效的将 量为15 X 10~3~2 X 10~5的大 蛋白跨膜转导入细胞内的多肽,改良型TAT-PTD则是在TAT-PTD的基础上改良而来的高效跨膜转导多肽,其跨膜转导大 蛋白的效率是TAT-PTD的30多倍。因此如将上述两者结合则可有效解决体外制备的VP3蛋

参考回答：把速自客信圾存 ,夺值到定重戏,后来因在的 G,额滴来的d过每一个玩式,,不极场可能

话题：求 克隆载体和表达载体

问题详情：求教各位大神 下克隆载体和表达载体。另外表达载体上需不需

回答：可以这样做:根据目的序列设计引物,5' 引物、3' 引物加酶切位点,PCR产物连接pGEM-T Easy载体,构建目的基因克隆载体。pGEM-T Easy不知现在还有没有 的,有点贵,但成功率很高。分别对pCAMBIA 1301和pBI 121双酶切,将pBI 121 gusA编码序列连同CaMV35S启动子和nos终止子片段反向 入pCAMBIA 1301多克隆位点,构建带有GUS载体。选适当的酶酶切自己构建的带有GUS的载体和目的基因CDS,构建中间载体,将中间载体CaMV35S启动子- 目的基因CDS-nos终止子 入片段进行测序验证,这个35S启动子来自pBI 121,目的基因CDS替换了来自pBI 121中的gusA编码序列。至此,构建的双元载体 有3个CaMV35S启

参考回答：本人觉得PBI121比较好用。

话题：载体就是基因表达载体吗?

回答：不是 基因表达载体是指已经 入了目的基因之后的载体

参考回答：你说的载体是不是细胞膜上用于运输的载体