配置聚丙烯酰胺凝胶时-小知识

话题：配置聚丙烯酰胺凝胶时,为什么浓缩胶和分离胶所用缓冲液

回答：在浓缩胶与分离胶之间有pH的不连续性,这是为了控制慢离子的解离度,从而控制其有效迁移率。要求在样品胶和浓缩胶中,慢离子较所有被分离样品的有效迁移率低,以使样品夹在快、慢离子界面之间,使样品浓缩。而在分离胶中慢离子的有效迁移率比所有样品的有效迁移率高,使样品不再受离子界面的影响。

话题：求SDS

回答：5ml .5%分离胶: H2O 2.35ml 30%丙烯酰胺溶液 1.25ml 1.5M Tris(pH.) 1.3ml 10%SDS 50ul 10%APS 50ul TEMED 4ul 5ml 4%浓缩胶: H2O 3ml 30%丙烯酰胺溶液 60ul 0.5M Tris(pH6.) 1.25ml 10%SDS 50ul 10%APS 50ul TEMED 4ul

话题：分离胶和浓缩胶的用途是什么?

回答：在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的 带,蛋白 就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比,这一 带便形成了较高的电压梯度,压着蛋白质 聚集到一起,浓缩为一狭窄的 带。当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白 根据其固有的带电性和 大小进行分离。

话题：聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白

回答：分离胶是下层胶,其中的缓冲液为pH.的Tris-HCl。 浓缩胶是上层胶,其中的缓冲液为pH6.的Tris-HCl。 电泳缓冲液为Tris、glycine和SDS配制,只要用 定质量的粉末配制,就不用调pH。

话题：SDS

问题详情：分离胶中的缓冲液PH为.,浓缩胶中的为6.

回答：在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.,分离胶pH.;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的 带,蛋白 就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比,这一 带便形成了较高的电压剃度,压着蛋白质 聚集到一起,浓缩为一狭窄的 带。当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白 根据其固有的带电性和 大小进行

话题：我的 量为62KD和65KD 用多大浓度的 分离胶和浓缩胶

回答：浓缩胶基本都是5%的就可以,分离胶建议10%的吧,电泳大约1小时以内(电压10),半干转膜大约40分钟以内(恒压)。

话题：测定蛋白质 量的常用方法

回答：知道蛋白质 量、氨基酸组成计算器 : .proteomicshttp://www.zhishizhan.net/xiaozhishi/tools/mwcal/ 一般的方法: SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的 量 [原理] 十二烷基硫酸钠(Sodiumdodecylsulfate,简称SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的 量,是六十 末Weber和Osborn在Shapiro等人在实验基础上发展起来的一项新技术。用这种方法测定蛋白质的 量具有快速灵便,设备简单等优点。 蛋白质的电泳迁移率在一般的电泳方法中,主要取决于它在某PH下所带的净电荷量、 大小(即 量)和形状的差异性,而SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对大多数蛋白质,主要取决于它们的 量,与原有的电荷量和形状无关。 SDS是一种阴

话题：在做聚丙烯酰胺凝胶电泳时为什么分离胶可以凝固,但浓缩胶

回答：主要可能是TEMED和AP的量的问题,你可以参考一下我的配方: 分离胶12.5%(SDS),10ml体系 分离缓冲:2.5ml 贮胶:4.16ml 纯水:3.233ml 10%SDS:0.1ml 10%AP:100微升 TEMED:5微升 ———————————————————————— 浓缩胶5%,4ml体系 浓缩缓冲:1ml 贮胶:0.6ml 纯水:2.35ml 10%AP:45微升 TEMED:15微升 ———————————————————————— 以上配方经本人亲用无数次证明切实有效,大概在一小时左右即可凝固,天冷凝得慢可放置于25度烘箱内帮助加速凝固。

话题：SDS

回答：电泳缓冲液是Tris-甘氨酸电泳缓冲液。 上样缓冲液是SDS缓冲液,需要加入Tris-Hcl,DTT,SDS,溴酚蓝和甘油。 分离胶 配制过程中的缓冲液是PH.的Tris-Hcl 浓缩胶 配制过程中的缓冲液是PH6.的Tris-Hcl

话题：wb实验中,为什么浓缩胶和分离胶 的电压不一致?同样的电

回答：浓缩胶的目的使得loading的样品能够在同一条水平线上进入分离胶,如果电压太大前端的蛋白容易在后面的蛋白赶上来 入分离胶。而在分离是理论上(实际上也是)小电压长时间分离的效果会更好,但是在 作过程中没有必要等那么长的时间,所以就用大电压快点跑。