DNA的碱基链是如何通过化学方法合成的-小知识的简介

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话题：DNA的碱基链是如何通过化学方法合成的?问题详情：那么请问,在文特尔人工合成DNA时,他是怎么做的?回答：我们采用固相亚磷酰胺三酯法合成DNA片段,它具有高效、快速的偶联以及起始反应物稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的,合成的。

小知识：DNA的碱基链是如何通过化学方法合成的-小知识

DNA的碱基链是如何通过化学方法合成的-小知识

时间:2016-04-13 21:09 来源: 我爱IT技术网编辑:佚名

话题：DNA的碱基链是如何通过化学方法合成的?

问题详情：那么请问,在文特尔人工合成 DNA时,他是怎么做的?

回答：我们采用固相亚磷酰胺三酯法合成 DNA 片段,它具有高效、快速的偶联以及起始反应物稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将 DNA 固定在固相载体上完成 DNA 链的合成的,合成的方向是由待合成引物的 3' 端向 5' 端合成的,相邻的核苷酸通过 3' → 5' 磷酸二酯键连接,具体反应步骤如下: 第一步:将预先连接在固相载体 CPG 上的活性基团被保护的核苷酸与三氯乙酸反应,脱去其 5'- 羟基的保护基团 DMT , 游离的 5'- 羟基。第二步:亚磷酰胺保护的核苷酸单体,与活化剂四氮唑混合,得到核苷亚磷酸活化中间体,它的 3' 端被活化,与 CPG 载体上连接碱基的 5'- 羟基发生缩合反应。第三步:带帽 (capping) 反应,缩合反应中会有少量

话题：简述DNA重组与克基本原理与过程。

回答：从真核生物的或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增, 即可 cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工等一系列问题。总之cDNA的合成和克隆已成为当今真核生物学的基本手段。自0 中叶首例cDNA克隆问世以来,已发展了多种提高cDNA合成效率的方法,并大大改进了载体系统,目前cDNA合成试剂已商品化。cDNA合成及克隆的基本步骤包括用反转录酶合成cDNA第一链,聚合酶合成cDNA第二链,加入合成接头以及将双链DNA克隆

话题：分离纯化 DNA片段中的物方法和原理?生物能源方面的

回答：找专业的生物方面的可以去生物帮,生物帮是生物行业门户 , 内容丰富、科学、专业,内容主要包括生命科学领域、技术文档、、生物问答、交流核心版块,每一个版块中有细分的和内容。首先利用低熔点琼脂糖凝胶电泳DNA片段,分离目的条带DNA,然后紫外光下切割含目的DNA条带的胶块,利用胶回收试剂盒回收纯化 DNA片段。试剂盒的胶回收柱采用特殊硅基质材料在一定的高盐缓冲系统下高效、专一地吸附DNA、RNA的原理(在高盐、低pH值情况下吸附DNA;低盐、高pH值情况下释放DNA。离心柱上含有Resin合成树脂,具有吸附DNA的功能),配备设计独特的离心吸附柱式结构,使用常台式

参考回答：科技秀

话题：简述DNA重组与克基本原理与过程

回答：(一)外源DNA和质粒载体的连接反应外源DNA片段和线状质粒载体的连接,也就是在双链DNA5'磷酸和相邻的3'羟基之间形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸,可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化,则吸能形成2个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个体带有2个单链切口(图1.),当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的5'磷酸和3'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的DNA连接酶催化,这两种酶就是大肠杆菌DNA连接酶和T4噬菌体DNA连接酶。实际上在有克隆用途中,T4噬菌体DNA连接酶都是首选的用酶。这是因为在下述反应条件下,它就能有效地将平端DNA片段连接起

参考回答：1. 目的基因,并进行酶切粘性末端2.将载体也进行酶切相同的粘性末端3.将载体与目的基因相连4.将重组好的载体导入宿

话题：关于DNA合成的纯化问题?

问题详情：现在正在 DNA合成的纯化问题详情题,前段时间一直在跑PAGE胶,

回答：增大PAGE浓度试试?

话题：DNA人工合成原理

问题详情：希望能详细一点,图文并茂,无比感谢!

回答：基因是由具有特定的核苷酸顺序的核酸组成的功能单位,它携有特定的遗传 ,在染色体上按一定的顺序排列。基因的基本单位为核苷酸,每个核苷酸包含三种成分:碱基、戊糖和磷酸。DNA的单体单位为脱氧核苷酸,其中戊糖是D-2-脱氧核糖。四种碱基分别为腺嘌呤(A) 、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)。在核苷酸中两类杂环化合物嘧啶和嘧呤具有很明显的芳香族特性。嘌呤本身可以认为是嘧啶的1种衍生物,它是1个嘧啶环和咪唑环耦合在一起组成的。在大多数细胞中,碱基只有少数呈游离或不结合形式存在,而且它们通常是酶水解核苷酸的产物。游离嘧啶和嘌呤碱基在水中是相对难溶解的,是弱碱性化合物,随pH

话题：35、半保留是(

回答：A 半保留 :两条成双链的DNA螺旋会先分开成为两条DNA单链,这两条DNA单链再各自成为模板,新的DNA单链合成于其上。因此完成之后新的DNA双螺旋 ,各自皆包含了一条新的DNA单链与一条旧的DNA单链。第一个是半保留

参考回答：选A。DNA在解旋酶的作用下解开双螺旋,同时合成与母链互补的一段子链,然后盘绕成双螺旋,每个新的DNA 中都有原DNA

话题：请问有谁知道核酸引物和探针PAGE纯化的步骤?

问题详情：各个步骤所用的试剂,时间请帮忙写的仔细点,谢谢

回答：第20章细胞基因分离鉴定和原位第一节细胞DNA、RNA的分离鉴定技术一、培养细胞基因组DNA的提取及鉴定人和哺乳动物细胞基因组DNA的分离通常是在有EDTA、Sarkosye等一类去污剂存在下,用蛋白酶K消化细胞,随后用酚、氯仿抽提,经RNase处理和纯化来提取DNA,可用于细胞凋亡中对所引起DNA断裂、凝胶电泳呈现“梯形”条带的实验,在细胞凋亡章节中已介绍了有关DNA的提取和凝胶电泳鉴定,除此之外,提取纯化的DNA还可用于分析其结构,序列性内切酶片断长度多态性及其基因和克隆。 (一)DNA提取方法: (1)取单层细胞,经无钙、镁PBS洗一次,用0.25%胰蛋白酶消化,细胞悬液经PBS洗2次

话题：扩增较段DNA的PCR方法作步骤?

回答：通常所用的PCR方法都在两个方面有限,即目标产物精确程度和合成片段的大小。Pfu(Pyrococcus furiosus)DNA聚合酶,具有完整的3’外切酶校读活性(3’-editing-exonuclease),可以将每个循环中碱基的错配率由10*-4降到10*-3,从而提高PCR产物的准确性。但它在扩增1.5-2.0kb片段时,效率比Klentaq l(Taq DNA聚酶N-末端缺失突变体,类似于E.coli DNA聚合酶I Klenow片段)或AmpliTaq(全长的Taq DNA聚合酶)等聚合酶差;在扩增5.0-.0kb片段时亦不比各种形式的Taq DNA聚合酶(如Ampli Taq、Klentaq 1、Klentaq 5等N-末端缺失的变异株)有明显优越之处。因而以往的PCR反应产物在5.0kb以内。超出这一范围,PCR扩