紫外吸收法与Folin-小知识

话题：紫外吸收法与Folin

回答：根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(lmax),由465nm变为55nm,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经 认为,染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。 在55nm下测定的吸光度值A55,与蛋白质浓度成正比。 Bradford法的突出优点是: (1)灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料

参考回答：这个方法容易被核酸干扰,而且测定混合有机成分时,极不准确。但简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后仍能回收使用。

话题：蛋白质浓度测定

回答：[原理] 由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,因此蛋白质溶液在20nm处具有紫外吸收高峰。在一定浓度范围内,蛋白质溶液在此波长处的吸光度与其浓度呈正比 ,因此利用这一性质可进行蛋白质定量测定。 该法迅速、简便、不消耗样品、低浓度盐类不干扰测定,可测定0.1~1.0mg/mL的蛋白质溶液。 由于蛋白质的紫外吸收高峰常因pH变化而改变,故应用此法时要注意溶液的pH。最好样品的pH与标准曲线制定时的pH一致。 生物帮上面就这有这个的详细介绍, 生物问答 : .zhibiohttp://www.zhishizhan.net/xiaozhishi/

话题：紫外吸收法测蛋白含量的实验报告

回答：蛋白质在20纳米波长处有最大吸收,用待测蛋白质溶液和空白溶液(通常用溶剂)分别在此波长下测的吸光度A,再用朗伯·比尔定律求就可以了。

话题：紫外吸收法测蛋白含量

回答：核酸会吸收紫外光,所以蛋白质溶液中有核酸会有影响。但是测蛋白质溶液是一般会用260nm,因为核酸吸收最厉害在20nm。 但是如果你要很准确,可以考虑用nuclease。

话题：为什么紫外测定蛋白含量时以bsa为标准蛋白

问题详情：使用酶标仪测定蛋白含量,利用蛋白与g250反应物的吸光值测定蛋

回答：紫外吸收法原理 大多数蛋白质由于有酪氨酸和色氨酸的存在,在紫外光20nm有吸收高峰,可以进行蛋白质含量的测定。但是核酸在20nm也有吸收,干扰测定,不过核酸的最大吸收峰在260nm。Warburg等测定了酵母烯醇酶和酵母核酸在20nm和260nm时A的比值,然后通过计算消除核酸存在的影响,可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。样品不需要经过预先处理,即可直接进行测定。方法简单而快速,又不损害样品中的蛋白质,测定之后的样品仍可作他用。样品中有硫酸或其他盐类存在也不影响测定。在柱层析分离酶或蛋白质时,常为人们所采用。 该方法是以酵母烯醇酶蛋白和酵母核酸为标准建立计算公式,而不同蛋白质的氨基酸

话题：使用紫外吸收法测定蛋白质浓度的结果纯度为150%可能是什

回答：你是以什么方法来计算纯度的?以紫外吸收或考马斯亮蓝测定的蛋白 浓度为 ,重量为分母W/W?紫外吸收法测定的是芳香族氨基酸的光吸收,20nm只是一个近似值,而且多种因素会导致光吸收的紫移或红移,所以光吸收不是一个定量的好办法。考马斯亮蓝法与试剂配制时间、pH都有 。一般蛋白定量 BCA法,具体的请参详蛋白质技术手册(汪家政)。

话题：如何将紫外分光光度计测量结果转换成蛋白质浓度?

回答：利用分光光度计测定蛋白 浓度需要先进行蛋白 浓度标准曲线绘制。就是测量一系列已知浓度 蛋白的吸光值,然后以蛋白 浓度为横坐标,吸光值为纵坐标绘制一条直线,然后将你所测样品的吸光值比对该直线所得横坐标即为样品的蛋白质浓度

参考回答：你先配一已知浓度的牛血清白蛋白作为对照,测其吸光度,然后比对一下就行了

话题：紫外分光光度测rna含量中有蛋白质如何排除干扰,有dna杂质

回答：DNA/RNA吸收光谱峰在260 nm处,据计算,测定此波长下DNA溶液的OD值,当OD260=1时,双链DNA含量约为50 μg/ml ,单链DNA与RNA含量为40 μg/ml ,寡核甘酸的含量为33 μg/ml ,据此可用紫外分光光度计测定溶液中DNA或RNA的含量。由于蛋白质的吸收峰在20 nm处,在测定 DNA或RNA含量时,还常计算 OD260/ OD20 之值,如该值为 1.~2.0时,认为已达到较高的纯度,如低于此值,表明其内含杂质较多。测量RNA时,DNA的影响无法校正。

参考回答：这个没法排除干扰,你只能去除杂质或者换其它方法来检测

话题：紫外法测蛋白 浓度

问题详情：紫外法测蛋白 浓度的计算公式:蛋白 浓度(mg/ml)=OD20*1.45-

回答：这是经验公式。既然是经验公式,自然就没有什么校正不校正的问题了。

话题：求 怎样用紫外分光光度法测蛋白质含量

问题详情：谢谢了哈 只要紫外分光光度法测定,不要其他测定方法哈

回答：四种紫外吸收法:1. 20nm的光吸收法用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为1.0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白(BSA)。标准曲线的测定:取6支试管,按下表编号并加入BSA(1.0 mg/mL)0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL,用蒸馏水补体积至5.0 mL;测定A20 :用第1管为空白对照,各管溶液混匀后在紫外分光光度计上测定吸光度A20,以A20为纵坐标,各管的蛋白质浓度或蛋白质量(mg)为横坐标作图,标准曲线应为直线。利用此标准曲线,根据测出的未知样品的A20值,即可查出未知样品的蛋白质含量。2. 20 nm和260 nm的吸收差法核酸对紫外光有很强的吸收,在20 nm处的吸收比蛋白质强10倍(

参考回答：只提醒下因为核酸在260nm有最大吸收波长,所以要考虑到蛋白质的是在20nm你测定的时候要把260的和20波长的都测定看他们的