为什么感受态细胞转化最佳期为对数生长中期论文需要，...

优质解答

你制作的应该是常规的大肠杆菌吧,我想在E.coli 快速增殖的过程中,细胞壁合成相比平稳期合成的不太充分,更易于质粒的转入.

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问题1：转化感受态细胞的目的是什么转化感受态细胞的前因后果

将构建好的载体转入感受态细胞进行表达,不仅可以检验重组载体是否构建成功,最主要的是感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验,如蛋白质表达纯化等工作

问题2：影响感受态细胞转化效率的因素有哪些[生物科目]

影响感受态细胞转化效率的因素及实际操作过程中应注意的事项：

1．细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制.DH5α菌株 OD600为 0.5 时细胞密度是 5 × 107/ml ）；

2．所有操作均应在无菌条件和冰上进行；

3．经 CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加, 24小时达到最高,之后转化率再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）；

4．化合物及无机离子的影响：在 Ca2+的基础上联合其他二价金属离子（如 Mn2+或 Co2+）、 DMSO 或还原剂等物质处理细菌,可使转化效率大大提高（ 100-1000 倍）；

5．所使用的器皿必须干净.迹量的去污剂或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率；

6．质粒的大小及构型的影响：用于转化的应主要是超螺旋的 DNA ；

7．一定范围内,转化效率与外源 DNA 的浓度呈正比；

问题3：什么是感受态细胞[生物科目]

野生型E.coli并不容易转化,这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA.经过多年的努力,科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率.那就是用化学方法处理细胞,使其改变膜对DNA的通透性.这种细胞就称为感受态细胞,即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态.这种方法已经成为基因工程的常规技术,它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要.细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation）,在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA,通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation）,在这种转化中,细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA.枯草杆菌中的转化属于自然转化,E.coli转化就属于工程转化.

问题4：感受态细胞如何吸收质粒[生物科目]

原核细胞（比如细菌）本身更易吸收外界DNA（限制性核酸内切酶最早就是从原核细胞中提取的）.用钙离子处理后,会进一步增大外源DNA进入原核细胞的机会（这就是所谓的感受态细胞）.

而细胞吸收生物大分子通常采用胞吞的方式（包括肺炎双球菌体内转化实验中S型DNA进入R菌的方式）.

问题5：感受态细胞的转化要注意些什么?

注意事项：

1．实验中所需氯化钙于冰浴后再使用

2．使用离心机前,要严格保证离心物品充分平衡,以免造成离心机损伤

3．大肠杆菌感受态一定放冰上溶化

4．热激和冰浴时间要科学把握