...1 ：GAATTC; Alu 1 ：AGCT ;Sma 1：CCCGGG2008年江苏...

优质解答

我们首先要明白酶切的目的是什么!其实就是把质粒切开一个缺口,好让目的基因进入!

而采用不同限制酶的原因是：载体上可用到的位点较少,确定载体需要的位点之后,再观察目的基因,但是载体上可用的酶可能在目的基因内部有酶切位点,例如你举得例子,在目的基因内部具有SmaI的位点,因此不能用这个酶,这时我们可以寻找SmaI的同尾酶,这样就可以进行特异性的酶切与连接了,在例子中举例的SmaI是一种平末端的限制性内切酶,因此选用了另一种平末端的酶AluI进行基因的酶切

明白了吧!?

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问题1：切割运载体和目的基因往往是用同一种限制酶还是两种?

是同一种,才好配对

问题2：既然用同一种限制酶切割载体和目的基因会发生自连 为什么还要这么做?应该用两种限制酶啊 可教科书上和作业里的答案为什么都是一种[化学科目]

不是同一种

是同种

用A和B限制酶切割载体,用C和D切目的基因

要求A=C或D,B=D或C,这是教科书的意思

你的理解是A=B=C=D

问题3：目的基因（1.5 kb）与载体（4 kb）通过EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切位点连接重组,预测重组子的目的基因PCR电泳图预测重组子EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切产物的电泳图.[生物科目]

彻底无语- -!

同学,得根据你的载体序列目的基因序列确定,一般都用软件处理,例如gene construction kit等.当然你手绘也可以- -!你想,通过这两个酶切位点把一个1.5kb的目的基因连到4kb载体上,可以有很多种情况.

同学,多上上专业论坛都比在百度知道上问人强.&不要问我软件在哪里下,就是你们实验室不做没有,问问你周围做载体的实验室吧.

问题4：运载体与目的基因必须用同一种限制酶处理吗?

不需要.只要末端能够相匹配就可以了.譬如说末端都是平末端,或者使用同尾酶产生相同的切口.

问题5：切割目的基因和载体为何必须用相同的限制性内切酶?只要目的基因和载体的黏性末端可以匹配上不同的限制性内切酶切割不是也可以吗?为什么卷子上说“必须用相同的限制性内切酶”?

当然要用相同的限制性内切酶来切了.因为只有用同种酶来切,才会因为有相同的作用位点而形成相同的黏性末端,不用同种酶来切虽然可能得到了相同的基因片段,但得到的粘性末端不相同.